A fluoreszcencia polarizáció (FP) egy hatékony technika, amelyet különféle területeken használnak, ideértve a biokémiát, a farmakológiát és a környezettudományt. Vezető fluoreszcencia -detektor beszállítóként megértjük a pontos és megbízható FP mérések fontosságát. Ebben a blogbejegyzésben megvizsgáljuk, hogyan lehet mérni a fluoreszcencia polarizációt, az alapelvektől a gyakorlati megfontolásokig.
A fluoreszcencia polarizáció alapelvei
A fluoreszcencia polarizáció azon a tényen alapul, hogy amikor a fluoreszcens molekulát a polarizált fény gerjesztik, a kibocsátott fény is polarizálódik. A kibocsátott fény polarizációjának mértéke a fluoreszcens molekula forgási mozgásától függ a fluoreszcencia élettartama alatt. Ha a molekula nagy vagy egy makromolekulához kötődik, akkor a forgási mozgása korlátozott, és a kibocsátott fény nagyon polarizált. Ezzel szemben, ha a molekula kicsi és oldatban van, akkor a forgási mozgása gyors, és a kibocsátott fény depolarizálódik.
A fluoreszcencia polarizációját a polarizációs érték (P) határozza meg, amelyet úgy definiálunk, mint a kibocsátott fény függőlegesen és vízszintesen polarizált komponenseinek intenzitása közötti különbség, amelyet összegük oszt meg:
[P = \ frac {i _ {\ párhuzamos} -i _ {\ perp}} {i _ {\ párhuzamos}+i _ {\ perp}}]]
ahol (i _ {\ párhuzamos}) a függőlegesen polarizált kibocsátott fény intenzitása, és (i _ {\ perp}) a vízszintesen polarizált kibocsátott fény intenzitása.
Műszerek a fluoreszcencia polarizációjának mérésére
A fluoreszcencia polarizációjának méréséhez szükség van egy polarizációs optikával felszerelt fluoreszcencia -detektorra. Cégünk számos, magas színvonalú fluoreszcencia -detektorokat kínál, beleértve aIzotermikus fluoreszcencia detektorÉs aDigitális izotermikus fluoreszcencia detektor, amelyeket kifejezetten pontos és érzékeny FP mérésekhez terveztek.
Ezek az érzékelők általában a következő összetevőkből állnak:
- Fényforrás: A gerjesztő fény előállításához egy fényforrást, például egy xenon lámpát vagy lézerét használják. A fényt polarizálni kell, mielőtt eléri a mintát.
- Polarizátorok: Polarizátorokat használnak a gerjesztési és emissziós fény polarizációjának szabályozására. A gerjesztő polarizát a gerjesztési fény útjára helyezik, hogy biztosítsa, hogy lineárisan polarizálódjon. Az emissziós polarizát a detektor elé helyezik, hogy megmérjék a kibocsátott fény függőlegesen és vízszintesen polarizált komponenseit.
- Mintatartó: A mintát egy mintatartót használják a minta a gerjesztési fény útján. Úgy kell megtervezni, hogy minimalizálja a fényszórást és a háttér -fluoreszcenciát.
- Detektor: A fotodetektor, például egy fotomultiplier cső (PMT) vagy töltéssel kapcsolt eszköz (CCD) használható a kibocsátott fény intenzitásának mérésére. Az érzékelőnek képesnek kell lennie arra, hogy a függőlegesen és a vízszintesen polarizált alkatrészek intenzitását külön -külön mérje.
Kísérleti beállítás a fluoreszcencia polarizációs mérésekhez
A következő lépések részt vesznek a fluoreszcencia polarizációjának mérésére szolgáló kísérlet felállításához:
- Válassza ki a megfelelő fluoreszcens szondát: Válasszon egy fluoreszcens szondát, amely alkalmas az alkalmazásához. A szondának magas kvantum hozammal és hosszú fluoreszcencia élettartammal kell rendelkeznie.
- Készítse elő a mintát: Készítse el a mintát a fluoreszcens szonda megfelelő pufferben történő feloldásával. Ha kötési interakciót tanulmányoz, adja hozzá a ligandumot vagy a makromolekulát a mintához a megfelelő koncentrációban.
- Kalibrálja a műszert: Kalibrálja a fluoreszcencia -detektorot a gyártó utasításai szerint. Ez magában foglalhatja a detektor nyereségének beállítását, a gerjesztés és az emissziós hullámhosszok beállítását, valamint a háttér -fluoreszcencia mérését.
- Mérje meg a polarizációs értékeket: Helyezze a mintát a mintatartóba, és mérje meg a kibocsátott fény függőlegesen és vízszintesen polarizált komponenseinek intenzitását. Számítsa ki a polarizációs értéket a fent említett képlet segítségével.
A fluoreszcencia polarizációs méréseket befolyásoló tényezők
Számos tényező befolyásolhatja a fluoreszcencia polarizációs mérések pontosságát és megbízhatóságát:
- Hőmérséklet: A fluoreszcens molekula forgási mozgása hőmérséklet -függő. A hőmérséklet növekedése a forgási mozgás növekedéséhez és a polarizációs érték csökkenéséhez vezet. Ezért fontos az állandó hőmérséklet fenntartása a mérés során.
- Az oldószer viszkozitása: Az oldószer viszkozitása befolyásolja a fluoreszcens molekula forgási mozgását. A viszkózusabb oldószer korlátozza a forgási mozgást és növeli a polarizációs értéket.
- A fluoreszcens szonda koncentrációja: A fluoreszcens szonda koncentrációja befolyásolhatja a polarizációs értéket. Magas koncentrációk esetén a szonda önmagában történő oltása és aggregációja fordulhat elő, ami pontatlan mérésekhez vezethet.
- Lámpatest: A fényfehérítés a fluoreszcens molekula visszafordíthatatlan megsemmisítése a gerjesztő fény által. Ez a fluoreszcencia intenzitásának csökkenéséhez vezethet, és befolyásolhatja a polarizáció mérését. A fényfehérítés minimalizálása érdekében használjon alacsony intenzitású gerjesztési fényt és rövid expozíciós időket.
A fluoreszcencia polarizáció alkalmazása
A fluoreszcencia polarizáció széles körű alkalmazást mutat különféle területeken:
- Kábítószer -felfedezés: Az FP -t használják a gyógyszerek és célpontjaik közötti kötődési kölcsönhatások tanulmányozására. A polarizációs érték mérésével meghatározhatja a gyógyszer -célkomplex kötődési affinitását és disszociációs állandóját.
- Immunválkozás: FP -alapú immunoassay -kat használnak antigének vagy antitestek jelenlétének kimutatására a biológiai mintákban. Az antigén kötődése az antitesthez jelölt fluoreszcens szondahoz a polarizációs érték megváltozásához vezet, amely felhasználható az analit számszerűsítésére.
- Nukleinsav -elemzés: Az FP felhasználható a nukleinsavak hibridizációjának tanulmányozására. A fluoreszcensen jelölt oligonukleotid komplementer szekvenciájához való kötődése a polarizációs érték megváltozásához vezet, amely felhasználható a cél nukleinsav kimutatására és számszerűsítésére.
A fluoreszcencia polarizációs mérések hibaelhárítása
Ha problémákkal szembesül a fluoreszcencia polarizációs mérések során, akkor a következő hibaelhárítási tippek hasznosak lehetnek:
- Alacsony polarizációs értékek: Ha a polarizációs értékek a vártnál alacsonyabbak, ellenőrizze, hogy vannak -e olyan tényezők, mint a magas hőmérséklet, az oldószer alacsony viszkozitása vagy a fluoreszcens szonda magas koncentrációja.
- Magas háttér -fluoreszcencia: A magas háttér -fluoreszcenciát a minta vagy az oldószer szennyeződései, vagy a fényszórás okozhatja. Tisztítsa meg a mintát, és használjon tiszta oldószert. Győződjön meg arról, hogy a mintatartó tiszta és mentes -e a karcolásoktól.
- Következetlen mérések: Az inkonzisztens mérések a fényfehérítésnek, a polarizátorok rossz igazításának vagy a fényforrás ingadozásainak oka lehet. Minimalizálja a fényfehérítést, ellenőrizze a polarizátorok igazítását, és ellenőrizze, hogy a fényforrás stabil -e.
Következtetés
A fluoreszcencia polarizáció mérése értékes módszer a kötési kölcsönhatások és a fluoreszcens molekulák molekuláris dinamikájának tanulmányozására. Fluoreszcencia -detektor beszállítójaként elkötelezettek vagyunk a magas színvonalú műszerezés és a műszaki támogatás nyújtása mellett a pontos és megbízható FP mérések elérése érdekében. Függetlenül attól, hogy gyógyszer -felfedezésen, immunszálakban vagy nukleinsav -elemzésben dolgozik -e, a miIzotermikus fluoreszcencia detektorésDigitális izotermikus fluoreszcencia detektorképes kielégíteni az Ön igényeit.
Ha érdekli a fluoreszcencia -detektorok megvásárlása, vagy bármilyen kérdése van a fluoreszcencia polarizációs mérésekkel kapcsolatban, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot a részletes konzultációs és beszerzési tárgyalásokért. Szakértői csapatunk készen áll arra, hogy segítsen Önnek az alkalmazásának legmegfelelőbb eszközének kiválasztásában.
Referenciák
- Lakowicz, JR (2006). A fluoreszcencia spektroszkópia alapelvei. Springer Science & Business Media.
- Szollosi, J., és Damjanovich, S. (2004). Fluoreszcencia polarizáció: Gyakorlati útmutató. A jelenlegi protokollokban citometriában (1–17. Oldal). John Wiley & Sons, Inc.