Itt létrehozzuk az sCRAM-ot (szuboptimális protospacer szomszédos motívum (PAM){0}}közvetített CRISPR RNS és Cas12a nukleáz kombinálva multienzimes izotermikus gyors amplifikációval), egy gyors és extrakciós -mentes diagnosztikai platform, amely 20 percen belül észleli az ASFV-t. Az sCRAM integrál egy gyors nukleinsav felszabadulási lépést (40 fok, 5 perc) egy egycsöves reakcióval, amely kombinálja a multienzim izoterm amplifikációt (MIRA) és a szuboptimális PAM{8}} közvetített CRISPR/
Cas12a rendszer (37 fok, 15 perc), amely lehetővé teszi a műszeres-ingyenes vizuális leolvasást UV-fényen vagy oldalirányú áramlási csíkokon (LFS) keresztül. Az sCRAM egyetlen-másolat-felismerési érzékenységet mutat, és nem mutat keresztreakciót öt gyakori sertéskórokozóval (PRRSV, PCV, PPV, PREV, JEVV). 111 szimulált és klinikai minta (beleértve a vért, a plazmát és a tamponokat) értékelése 100%-os egyezést mutatott ki a qPCR-rel az UV-leolvasás és 98,20%-os az LFS esetében
mindkét módszer 100%-os specificitást mutat. Az sCRAM egyszerűsége, sebessége és terepi adaptálhatósága alátámasztja a decentralizált ASFV-felügyeletben rejlő lehetőségeket korlátozott erőforrás--beállításokban, és hatékony eszközt kínál a járvány megfékezésére.
Ebben a tanulmányban kifejlesztettük az sCRAM-ot, egy gyors és terepen{0}}telepíthető ASFV-észlelési platformot, amely a szuboptimális PAM-közvetített CRISPR/Cas12a-t multienzimes izotermikus erősítéssel integrálja. A vizsgálat egyetlen-kópia/uL érzékenységet ér el 20 percen belül, és nem mutat keresztreakciót a fő sertéskórokozókkal. A vér-, plazma- és tamponminták klinikai validálása teljes egyezést mutatott a qPCR-rel az UV fény leolvasásával és 98,20%-os pontossággal az oldalirányú áramlási csíkokon keresztül. Az egyszerűsített működésnek, a nagy érzékenységnek és specifitásnak, valamint a vizuális eredmények értelmezésének köszönhetően az sCRAM komoly lehetőségeket kínál az ASFV helyszíni megfigyelésére és szélesebb körű diagnosztikai alkalmazásokra.
