A tanulmányban szereplő RPA-CRISPR/Cas12a rendszer gyors (30–40 perc), ultra-érzékeny (1 kópia/μL) HCMV kimutatást tesz lehetővé a korai-expresszált UL123 gén megcélzásával, felülmúlva a hagyományos módszereket a klinikai mintavizsgálatban. Ez az innováció lehetővé teszi az alacsony vírusfertőzések időben történő diagnosztizálását{12 immunhiányos betegeket, és kiemeli a CRISPR{11}}alapú diagnosztika megvalósíthatóságát a HCMV{12}}kapcsolódó betegségek kezelésének javításában. Az assay egyszerűsége és hatékonysága rávilágít arra, hogy a korlátozott erőforrások{16}}beállítása{14}}gondozó eszköze{15}}.
Az RPA erősítési helyek mintái és a kit kiválasztása.
(A) Az RPA primer tervezése az amplifikációs fragmensek elhelyezkedését illetően. A nyilak jelzik a P1-P6 primerekkel amplifikált fragmens bázispozícióit az elejétől a végéig.
(B) Az RPA termék agaróz gél elektroforézis képe 6 HCMV primer készlettel amplifikálva.
(C) Különböző cégek RPA készleteinek erősítési hatékonyságának szűrése. P: Primer, NC: Negatív kontroll.
Az eredmények azt mutatták, hogy az AmpFuture kit mutatta a legmagasabb erősítési hatékonyságot.
A MIRA-CRISPR/Cas12a, a PCR - Fluorescent Probe Method és a qPCR pozitív arányának összehasonlítása klinikai mintákban.
48 klinikai betegtől vettünk vér- és vizeletmintát. Ezekből a mintákból a genomi DNS-t a TIANamp Genomic DNA Kit segítségével extraháltuk, és az UL122 kimutatás eredményeit PCR-fluoreszcens próba módszerrel elemeztük. Eredményeinket a klinikai diagnózisokkal összehasonlítva módszereink 6 olyan pozitív mintát azonosítottak, amelyek a klinikai tesztekben negatívak voltak.
