A molekuláris diagnosztika területén a polimeráz láncreakciót (PCR) régóta a nukleinsav kimutatás arany standardjának tekintik. Az elmúlt években a rekombináz polimeráz amplifikáció (RPA) által képviselt izoterm amplifikációs technológiák gyorsaságuk, egyszerűségük és helyszíni tesztelésre való alkalmasságuk miatt egyre nagyobb figyelmet kaptak.
Bár mind a PCR, mind az RPA nukleinsav-amplifikációs módszerek, működési elveikben, berendezési követelményeikben és alkalmazási forgatókönyveiben jelentősen eltérnek egymástól, így mindegyik technológia különböző diagnosztikai igényekre alkalmas.
1. Alapelvek: Termikus kerékpározás vs. állandó-hőmérséklet-erősítés
A PCR egy biokémiai folyamat, amely egyetlen DNS-molekulát képes rövid időn belül milliós másolatokká amplifikálni. A reakció ismételt hőcikluson alapul, és három fő lépésből áll:
1. Denaturáció (90–95 fok) – A kettős-szálú DNS egyetlen szálra válik szét.
2.Annealing (55-65 fok) – A primerek a célszekvenciákhoz kötődnek.
3. Extension (72 fok) – A DNS-polimeráz új DNS-szálakat szintetizál.
Ezeken a hőmérsékleten{0}}vezérelt ciklusokon keresztül a cél-DNS nagy pontossággal exponenciálisan amplifikálódik. A PCR-hez azonban összetett hőciklusos műszerekre van szükség, és általában 1–2 órát vesz igénybe.
Ezzel szemben az RPA állandó, 37-42 fokos hőmérsékleten működik, lehetővé téve a gyors nukleinsav-amplifikációt termikus ciklus nélkül. A technológia a rekombinázfehérjék, az egyszálú DNS-t{4}}kötő fehérjék és a szál-kiszorító DNS-polimeráz összehangolt működésén alapul, hogy izoterm körülmények között nagyon specifikus célamplifikációt érjenek el.
Az RPA-ban használt DNS-polimeráz szálkiszorító aktivitással rendelkezik, de hiányzik belőle az 5'→3' exonukleáz aktivitás. Az amplifikáció során a külső primerek a templátszál mentén húzódnak. Amikor belső primerekből szintetizált kettős-szálú régiókkal találkoznak, a polimeráz nem tudja lebontani a downstream szálat, hanem kiszorítja azt, új amplifikációs termékeket hozva létre.
A teljes reakció állandó hőmérsékleten megy végbe, így nincs szükség bonyolult műszerezésre, és lehetővé válik a valódi -figyelem-pontja és helyszíni-alapú tesztelése. A reverz transzkriptáz beépítésével az RPA RNS-célpontok kimutatására is alkalmazható.
Az amplifikációs eredmények többféle kiolvasási formátum használatával elemezhetők, beleértve a végpont-detektálást, a valós idejű fluoreszcencia-figyelést, az oldalirányú áramlási teszteket, és tovább integrálhatók a CRISPR-Cas rendszerekkel, mikrofluidikákkal vagy a következő-generációs szekvenálás (NGS) segítségével a fejlett tesztfejlesztés érdekében.
Alkalmazási forgatókönyvek: Laboratóriumi pontosság kontra -Helyszíni gyorstesztelés
A PCR az egyik legértékesebb molekuláris diagnosztikai technológiává vált, és továbbra is a nukleinsavvizsgálatok arany standardja.
Nagy pontosságának, költséghatékonyságának és méretezhetőségének köszönhetően a PCR-t széles körben használják a klinikai diagnosztikában, a központosított laboratóriumokban, a kutatóintézetekben és a nagy-szűrési programokban, ahol az infrastruktúra és a képzett személyzet könnyen elérhető.
Az RPA ezzel szemben egyértelmű előnyöket kínál a gyors,{0}}helyszíni diagnosztikában. A mindössze 20 perc alatt végrehajtott erősítésnek, minimális felszerelési igénynek és egyszerű kezelésnek köszönhetően az RPA ideálisan alkalmas.
- Egészségügyi alapellátás és sürgősségi beállítások
- Vám- és határellenőrzés
- Állat- és növénybetegségek helyszíni szűrése
- Környezetvédelmi és élelmiszerbiztonsági vizsgálat
Hordozható eszközökkel és oldalirányú áramlási csíkokkal kombinálva az RPA gyors és megbízható molekuláris tesztelést tesz lehetővé a hagyományos laboratóriumokon kívül.
MIRA (Multienzyme Isothermal Rapid Amplification)az Amp Future saját fejlesztésű izotermikus erősítő technológiája. Ugyanabba a technikai családba tartozik, mint az RPA, és természetes DNS-rekombinációs és -javító mechanizmusok ihlették, több funkcionális enzimet használva a gyors nukleinsav-amplifikáció eléréséhez állandó hőmérsékleten.
A MIRA öt kulcsenzimből álló koordinált rendszert alkalmaz, beleértve a helikázt, a rekombinázt, az egyszálú DNS-kötő fehérjét- és a DNS-polimerázt, hogy lehetővé tegye:
- Széles üzemi hőmérséklet tartomány: 25-45 fok
- Gyors erősítés: 20 percen belül az eredmény
- Magas érzékenység és specifitás
- Fokozott biztonság és csökkentett szennyeződési kockázat
A MIRA egy nukleinsav-amplifikációs technológia, amelyet kifejezetten a helyszíni és gondozási
A MIRA platformra építve az Amp Future átfogó termékportfóliót fejlesztett ki a gyors molekuláris POCT számára, beleértve:
Gyors nukleinsav-leadó szer:
Szobahőmérsékleten 5 percen belül amplifikálható nukleinsavat kapunk; alacsony gátlás, amely lehetővé teszi a teljes minta betöltését 50 μL-ig; szobahőmérsékletű szállítás és tárolás, fényvédelem nem szükséges.
Izoterm nukleinsav-amplifikációs reagens:
Az amplifikáció 5-20 perc alatt befejeződött, gyors és hatékony; különféle reagensformák (liofilizált por, liofilizált mikrogömbök stb.); különböző eredménybemutatási módszerek (elektroforézis, fluoreszcencia, tesztcsíkok).
Miniatürizált hordozható eszközök:
Digitális izotermikus detektorok, zseb{0}}méretű tesztelőeszközök, könnyen egy kézben tartva, powerbankkal felszerelve, megszabadítva Önt a laboratóriumi korlátoktól, és pontos nukleinsav-tesztelést tesznek lehetővé.
Egyetlen/több tesztcsík:
A MIRA módszertan alapján optimalizálva a jobb kompatibilitás érdekében; MIRA technológiával kombinálva, kiemelve a kényelmet.
Teljesen automatizált nukleinsav-amplifikációs analizátor:
Csak egy mintabetöltési művelet szükséges a teljesen automatizált észleléshez; észlelési határ egyetlen példányig; izoterm erősítés és automatikus kupakolás csökkenti a szennyeződés kockázatát.
Helyszíni gyorstesztelési csomag:-
Helyszíni tesztelés--bármikor, bárhol, mindezt egy csomagban; 30 perc alatt befejezi a tesztelést, pontos és érzékeny.
További termékinformációkért vagy megoldásokért forduljon hozzánk bizalommal.